Эффективен ли анализ крови для выявления туберкулеза вместо пробы манту

Взятие слюны для анализов

По сравнению с сывороткой, жидкость полости рта имеет ряд преимуществ: низкое содержание белка, простой сбор и простоту хранения. Слюна ранее использовалась для диагностики таких системных заболеваний, как гепатит, ВИЧ, почечные расстройства, сердечно-сосудистые болезни, аутоиммунные патологические процессы, рак, диабет и другие инфекционные состояния.

В последнее время группа исследователей отважилась на поиск маркеров туберкулеза в слюне. Исследователи сравнили сыворотку со слюной, и было показано, что некоторых воспалительных веществ у больного гораздо больше в жидкости полости рта, чем в крови.

Эти исследования выглядят многообещающе для пользы диагностики туберкулеза. Однако, пока выявление заболевания с использованием слюны невозможно.

www.ncbi.nlm.nih.gov

Кому необходимо сдавать кровь на туберкулез

Сдавать кровь необходимо лицам, которые попадают в опасную группу. Это врачи, работники тюрем, приютов для бездомных, анти социальные личности наркоманы и алкоголики, больные СПИДом и те, кто имеет сниженный иммунитет, и кто делал химиотерапию. Опасными являются больные лица, у которых открытый тип туберкулеза. Люди, которые общались с больным человеком, также должны сдать анализы.

Желательно сдать кровь на инфекцию гражданам, которые посещали места с большой степенью заражения Индия и Китай, Южная Африка и Пакистан, Нигерия и Индонезия.

Кровь сдается натощак. Перед этим противопоказано употреблять алкоголь и лекарственные препараты, которые могут отразиться на заключении.

На рентген могут направить лиц с перманентным бронхитом или частыми воспалениями легких. В опасную группу входят больные сахарной болезнью, перманентной неполноценностью надпочечников, язвой желудка, а также те, кто перенес хирургическую операцию по удалению язвы.

Анализы особой подготовки не требуют. Единственное, врач может сказать, что исключить из пищи или лекарств перед диагностированием.

Только пульмонологи решает, какие необходимо сдать дополнительно анализы, потому что одного исследования крови может быть недостаточным.

Кроме флюорографии больным делают снимок рентгена в боковом изображении. Дорогим, но наиболее верным будет компьютерная или магнитная и резонансная томография.

Альтернативные методы диагностики туберкулеза

Согласно федеральным клиническим рекомендациям Российского общества фтизиатров, с целью исключения туберкулеза у ребенка возможно использование альтернативных методов обследования. Заменить традиционные проверки могут следующие методики: Диаскинтест, Квантифероновый тест, Т-Спот исследование, обзорная рентгенография органов грудной клетки.

Анализы крови

Общеклинический анализ крови нельзя использовать вместо Манту. При заболевании туберкулезом в ОАК обнаруживается лейкоцитоз (увеличение количества лейкоцитов выше нормы), сдвиг лейкоцитарной формулы влево, увеличение скорости оседания эритроцитов (СОЭ).

Такие изменения не являются специфическими для туберкулеза, и происходят при любом воспалительном процессе в организме. Результаты биохимического анализа крови также будут без заметных изменений.

Исследование сыворотки крови способом полимеразной цепной реакции (ПЦР) для скринингового обнаружения туберкулеза у детей не рекомендуется, поскольку выделить геномные фрагменты (части ДНК) возбудителей из крови возможно только при генерализованном туберкулезном процессе. Метод ПЦР пригоден для диагностических целей – выделения микобактерий туберкулеза в биологических образцах: мокроте, смывных водах бронхов, экссудате плевральной полости, спинномозговой и внутрисуставной жидкости. Использование ПЦР вместо проведения реакции Манту нецелесообразно.

Метод иммуноферментного анализа (ИФА) крови также не применяется при скрининге туберкулеза. Способ ИФА основан на обнаружении специфических антител в крови, а при туберкулезе действует другой патогенез иммунного ответа организма – антител в крови мало.

Анализ мочи

Анализ мочи также не является альтернативой туберкулиновым пробам, а лишь помогает в диагностике туберкулезного поражения мочевыводящей системы. В результатах исследования мочи можно обнаружить признаки амилоидных трансформаций только при внелегочных формах туберкулеза (изменения в почках, мочевом пузыре), а ПЦР мочи подтвердит диагноз.

Методика Диаскинтест

На сегодняшний день наибольшей восприимчивостью, избирательностью и минимальным аллергенным действием обладает проба с биопрепаратом «Диаскинтест». Он представляет собой аллерген туберкулезный рекомбинантный (АТР) и предназначается для внутридермального введения.

Методика инъекции и трактовка результатов аналогичны проведению пробы Манту, однако достоверность этого теста значительно выше. Тест считается положительным, если размер постинъекционной папулы превышает 3 мм. Крайне редко встречаются ложноположительные результаты при снижении у обследуемого общего иммунитета во время какого-либо сопутствующего заболевания.

Внутрикожный тест с АТР является единственной заменой проведения реакции с туберкулином по закону.

Метод квантиферонового теста

Для проведения квантиферонового теста придется сдать кровь из вены. Способ QuantiFERON — TB Gold основан на иммуносорбентном анализе определения специфических антител, продуцируемых Т-лимфоцитами, с помощью меченых ферментов.

Квантифероновый метод обладает высокой чувствительностью. Крайне высокая стоимость этого анализа исключает возможность широкого применения.

Т-Спот исследование

Т-спот метод (T-SPOT.TB, спот-реакция) не менее информативен, чем квантифероновый анализ. Главным отличием является определение самих Т-лимфоцитов, которые продуцируют антитела в ответ на внедрение микобактерий. Это исследование позволяет проверить пациентов, подлежащих диагностике, из группы повышенной угрозы по возникновению туберкулезной инфекции (например, ВИЧ-инфицированных).

Рентген грудной клетки

В качестве альтернативы пробы Манту можно провести рентген грудной клетки с последующей консультацией врача-фтизиатра

Согласно Приказу Министерства Здравоохранения РФ № 951 2014 года возможно проведение рентгенологического исследования (обзорной рентгенограммы грудной клетки) для исключения заболевания туберкулезом. Рентгенография или КТ органов грудины также является альтернативой внутрикожным пробам и может использоваться вместо Манту. Однако необходимо помнить, что при использовании рентгенологического обследования организм ребенка получает достаточно вредную лучевую нагрузку.

Результаты пробы

Реакция пробы может быть:

• отрицательной;
• сомнительной;
• положительной.

В случае отсутствия в организме возбудителя заболевания, аллергической реакции наблюдаться также не будет. Если же место инъекции обозначилось припухлостью и покраснением, иначе говоря, произошло образование папулы, тогда, дополнительно исследуется кровь, для исключения возможного инфицирования.

Проблема с применением пробы манту заключается в том, что реакция бывает положительной даже в том случае, когда человек не является носителем инфекции и тем более не болеет туберкулёзом.

Положительную реакцию на пробу под силу спровоцировать:

• хроническому тонзиллиту;
• ОРВИ;
• ОРЗ;
• глистным инвазиям;
• аллергическому васкулиту;
• прочим болезням.

В таких случаях пробу вводят повторно.

Противопоказано применение пробы манту при поражении тяжёлыми кожными болезнями, сердечным ревматизмом, бронхиальной астмой, эпилепсией.

Исследования крови

Вместо Манту в последнее время все чаще прибегают к сдаче специального анализа крови на туберкулез (ТБ). Этот способ зарекомендовал себя как более точный, быстрый и удобный. Существует несколько методик определения возбудителя туберкулеза в крови.

Иммуноферментный анализ

В основе ИФА лежит серологический метод исследования связи между антигенами и антителами. Специфика метода состоит в определенной иммунохимической реакции (определенные антитела реагируют на конкретные антигены) и введению ферментативной метки (маркера, который несут в себе антитела) с помощью различных химических, биохимических и иммунологических способов.

ИФА

ИФА направлен на обнаружение в крови антител к ТБ, которые свидетельствуют о наличии инфекции (но не обязательно о развивающемся заболевании). Этот метод особенно эффективен для диагностики внелегочного ТБ и скрытых форм в случаях, когда рентген и биохимические анализы мокроты не показывают всю картину.

Антигены микобактерий являются специфическими, поэтому вероятность ложного результата крайне мала. ИФА проводится пациентам на основании жалоб, схожих с симптомами ТБ (кашель, общая интоксикация) в качестве дополнительной диагностики и детям с противопоказаниями к туберкулиновой пробе.

Преимуществом данного метода является также его нечувствительность к вакцинации БЦЖ.

Для этого анализа сдается кровь из вены натощак. Кроме того, за 12 часов до забора крови нужно исключить прием антибиотиков. Результат анализа обычно бывает готов уже через несколько часов. Показатель от 0 до 0,8 говорит об отсутствии активной формы ТБ.

К недостаткам данного теста относят невозможность определения количества бактерий и все-таки не 100% точность.

ПЦР диагностика

Аббревиатура ПЦР расшифровывается как полимеразная цепная реакция. Этот метод представляет собой исследование на ДНК-уровне при помощи фермента – полимеразы. Главное преимущество этого анализа – высокая точность благодаря возможности выявить в биоматериале (в частности, в крови, хотя чаще на анализ берется мокрота) даже единственную клетку возбудителя болезни.

ПЦР диагностика

Этот молекулярно-генетический метод позволяет выявлять ТБ на самых ранних стадиях. Более того, с помощью этого теста можно определить резистентность микобактерий к выбранным для лечения антибиотикам.

К недостаткам исследования ПЦР на туберкулез, проводимого вместо Манту, относят его высокую стоимость (из-за использования дорогого оборудования) и низкую чувствительность этого анализа конкретно в детском возрасте (у детей и подростков возможны ложноотрицательные результаты в широком интервале 25-83% случаев).

Квантифероновый тест

Квантифероновый тест (QFN), разработанный американской компанией QIAGEN, представляет собой забор венозной крови в пробирки и дальнейшее воздействие на биоматериал с помощью антигенов (микобактериальных протеинов) и анализ клеточно-иммунного ответа (высвобождаемого гамма-интерферона).

В соответствии с полным протоколом в состав набора для QFN входят три пробирки для контроля отрицательного (нулевая) и положительного результата (с митогеном) и пробирку с ТВ-антигенами. Этот способ исследования хорошо зарекомендовал себя уже в 17 крупных странах мира.

Показания к проведению квантиферонового теста

Данный тест так же, как и предыдущие, нечувствителен к вакцинации БЦЖ, обладает высокой точностью (благодаря использованию высокоспецифичных синтетических белков) и еще большей, чем у ПЦР, чувствительностью (89%). Интерфероновый тест показан детям с противопоказаниями к туберкулиновой пробе, но наиболее точным он становится с 4-5 лет (по другим данным, с 2 лет), когда уменьшается вероятность ложного результата.

С 2016 года метод QFN прошел перерегистрацию в России и используется в лабораториях частных клиник.

Т-Спот

Т-Спот – современный метод исследования, основанный на лабораторной технологии ELISPOT (Enzyme-Linked ImmunoSpot), который изучает иммунный ответ организма. ELISPOT был разработан в Швеции еще в 1983 году, а сравнительно недавно благодаря трудам ученых Оксфордского университета и компании Oxford Imunotec стал применяться для диагностики ТБ. С 2004 года он включен в стандарты Евросоюза.

Т-Спот схож с квантифероновым тестом: также связан с выработкой гамма-интерферона. Отличие этих двух анализов в том, что Т-спот определяет именно Т-лимфоциты (отсюда и буква Т в названии), которые производят интерферон. Т-Спот и QFN в равной степени точны и чувствительны к микобактериям и безопасны для применения в детской и подростковой возрастных группах.

Альтернативные методы диагностики туберкулеза

Согласно федеральным клиническим рекомендациям Российского общества фтизиатров, с целью исключения туберкулеза у ребенка возможно использование альтернативных методов обследования. Заменить традиционные проверки могут следующие методики: Диаскинтест, Квантифероновый тест, Т-Спот исследование, обзорная рентгенография органов грудной клетки.

Анализы крови

Общеклинический анализ крови нельзя использовать вместо Манту. При заболевании туберкулезом в ОАК обнаруживается лейкоцитоз (увеличение количества лейкоцитов выше нормы), сдвиг лейкоцитарной формулы влево, увеличение скорости оседания эритроцитов (СОЭ).

Такие изменения не являются специфическими для туберкулеза, и происходят при любом воспалительном процессе в организме. Результаты биохимического анализа крови также будут без заметных изменений.

Исследование сыворотки крови способом полимеразной цепной реакции (ПЦР) для скринингового обнаружения туберкулеза у детей не рекомендуется, поскольку выделить геномные фрагменты (части ДНК) возбудителей из крови возможно только при генерализованном туберкулезном процессе. Метод ПЦР пригоден для диагностических целей – выделения микобактерий туберкулеза в биологических образцах: мокроте, смывных водах бронхов, экссудате плевральной полости, спинномозговой и внутрисуставной жидкости. Использование ПЦР вместо проведения реакции Манту нецелесообразно.

Метод иммуноферментного анализа (ИФА) крови также не применяется при скрининге туберкулеза. Способ ИФА основан на обнаружении специфических антител в крови, а при туберкулезе действует другой патогенез иммунного ответа организма – антител в крови мало.

Анализ мочи

Анализ мочи также не является альтернативой туберкулиновым пробам, а лишь помогает в диагностике туберкулезного поражения мочевыводящей системы. В результатах исследования мочи можно обнаружить признаки амилоидных трансформаций только при внелегочных формах туберкулеза (изменения в почках, мочевом пузыре), а ПЦР мочи подтвердит диагноз.

Методика Диаскинтест

На сегодняшний день наибольшей восприимчивостью, избирательностью и минимальным аллергенным действием обладает проба с биопрепаратом «Диаскинтест». Он представляет собой аллерген туберкулезный рекомбинантный (АТР) и предназначается для внутридермального введения.

Методика инъекции и трактовка результатов аналогичны проведению пробы Манту, однако достоверность этого теста значительно выше. Тест считается положительным, если размер постинъекционной папулы превышает 3 мм. Крайне редко встречаются ложноположительные результаты при снижении у обследуемого общего иммунитета во время какого-либо сопутствующего заболевания.

Метод квантиферонового теста

Для проведения квантиферонового теста придется сдать кровь из вены. Способ QuantiFERON – TB Gold основан на иммуносорбентном анализе определения специфических антител, продуцируемых Т-лимфоцитами, с помощью меченых ферментов.

Квантифероновый метод обладает высокой чувствительностью. Крайне высокая стоимость этого анализа исключает возможность широкого применения.

Т-Спот исследование

Т-спот метод (T-SPOT.TB, спот-реакция) не менее информативен, чем квантифероновый анализ. Главным отличием является определение самих Т-лимфоцитов, которые продуцируют антитела в ответ на внедрение микобактерий. Это исследование позволяет проверить пациентов, подлежащих диагностике, из группы повышенной угрозы по возникновению туберкулезной инфекции (например, ВИЧ-инфицированных).

Рентген грудной клетки

Согласно Приказу Министерства Здравоохранения РФ № 951 2014 года возможно проведение рентгенологического исследования (обзорной рентгенограммы грудной клетки) для исключения заболевания туберкулезом. Рентгенография или КТ органов грудины также является альтернативой внутрикожным пробам и может использоваться вместо Манту. Однако необходимо помнить, что при использовании рентгенологического обследования организм ребенка получает достаточно вредную лучевую нагрузку.

Минздрав разрешил вместо пробы Манту делать детям анализ крови

Новосибирские эксперты рассказали о заболеваемости туберкулёзом среди детей и подростков

Минздрав предоставил возможность родителям выбирать метод диагностики туберкулёза для своего ребёнка. Среди вариантов тестирования, результаты которых обязаны приниматься в дошкольное учреждение, – проба Манту, Диаскин-тест и Т-тест, выполняемый по анализу крови.

Эта информация опубликована на сайте Минздрава. Сообщается, что новые рекомендации по проведению тестирования на туберкулёз приняты Всероссийским обществом фтизиатров.

«Результаты каждого из этих тестов будут признаваться достаточными для приёма ребёнка в дошкольное учреждение», – утверждает Минздрав.

Ранее на пресс-конференции, посвящённой Дню борьбы с туберкулёзом, новосибирские эксперты рассказали о распространённости этой инфекции среди детей в Новосибирской области, а также напомнили о важности своевременной диагностики. Как отметила Жанна Шакуро, заведующая детским отделением филиала ГБУЗ НСО НОПТД «Противотуберкулезный диспансер №6», заболеваемость туберкулёзом среди детей Новосибирской области снижается, хотя и не столь быстрыми темпами, как среди взрослого населения

Как отметила Жанна Шакуро, заведующая детским отделением филиала ГБУЗ НСО НОПТД «Противотуберкулезный диспансер №6», заболеваемость туберкулёзом среди детей Новосибирской области снижается, хотя и не столь быстрыми темпами, как среди взрослого населения.

По её словам, основную массу заболевших составляют дети дошкольного возраста. При этом лишь около 13% пациентов составляют дети из неблагополучных семей.

«На сегодняшний день рецидивов по окончании лечения у детей и подростков мы не имеем. И чем раньше выявлен туберкулёзный процесс на ранней стадии, тем эффективнее его лечение и тем благоприятнее прогноз у этого пациента» , – рассказала эксперт.

Татьяна Колпакова, руководитель клинического отдела ФГБУ «Новосибирский научно-исследовательский институт туберкулёза» Минздрава России, напомнила, что, согласно действующему законодательству, каждый ребёнок при поступлении в школу или в дошкольное учреждение обязательно должен быть обследован на туберкулёз. Основным методом диагностики остаётся туберкулинодиагностика (или реакция Манту), в качестве дополнительных применяются Диаскинтест, компьютерная томография и рентгенологическое обследование.

Реакция Манту проводится детям до 18-ти лет, Диаскинтест – подросткам с 15-ти до 18-ти лет. При этом Татьяна Колпакова уточнила, что это не взаимозаменяемые методики: основным методом диагностики остаётся реакция Манту, остальные процедуры могут быть проведены в качестве дополнительных.

Также эксперт добавила, что абсолютных противопоказаний против реакции Манту не существует.

«Сейчас всплывает такая проблема, когда узкие специалисты выписывают медотвод от туберкулинодиагностики, что на сегодняшний момент неправомочно, они нарушают законодательство Российской Федерации» , – предупредила она.

Тем не менее, родители ребёнка вправе отказаться от туберкулинодиагностики, и в этом случае наиболее надёжной альтернативой становится рентген.

«Но рентгенологическое обследование показывает уже сам туберкулёзный процесс в организме ребёнка, мы не можем увидеть тот момент, когда ребёнок инфицирован, то есть когда к нему попали бактерии туберкулёза извне» , – объяснила Татьяна Колпакова.

По её словам, преимущество реакции Манту в том, что этот метод позволяет отследить инфицирование и назначить превентивное лечение, которое предупредит развитие туберкулёзного процесса.

«Родители нам часто говорят: «Я знаю, что ребёнок мой здоров». Но знать – это не значит быть здоровым. Чтобы действительно знать, что ваш ребёнок здоров, надо пройти обследование», – напомнила специалист.

Уже после пресс-конференции появилась информация о расширении методик диагностики туберкулёза за счёт Т-теста (Т-СПОТ), выполняемого по анализу крови. Предложение дать родителям выбор в этом вопросе было инициировано Уполномоченным при президенте РФ по правам ребёнка Анной Кузнецовой.

Когда может понадобится альтернатива

Альтернатива необходима в 2 случаях:

1. Для точной диагностики при подозрении на туберкулез. Вместо пробы Манту требуется иное обследование.
2. Если родители отказываются ставить классический вариант прививки, а ребенок посещает детский сад или школу.

Плюсы и минусы Манту

Проба имеет следующие преимущества:

• дешевизна туберкулина;
• простота методики;
• возможность за несколько часов полностью обследовать детский коллектив.

Недостаток реакции Манту – это частый ложный положительный результат. Кроме того, по данным ВОЗ, ценность положительной пробы на туберкулин для оценки вероятности развития туберкулеза крайне низкая.

Порядок проведения анализа ПЦР

Процедура проведения анализа ПЦР проводится посредством специального прибора под названием амплификатор, и состоит из четырех этапов. Для проведения исследования необходимы участки ДНК, с которых начинается синтез молекул, нуклеотиды (основы молекул ДНК), а также полимераза, или фермент, ускоряющий проведение процедуры.

1. Забор биологического материала (мокрота, кровь, смывы бронхов).
2. Прогревание образца до температуры около 98% для разрушения первичной структуры цепочки ДНК.
3. Отжиг, или снижение температуры на несколько градусов, чтобы связать праймер с нитью ДНК.
4. Синтез молекул, необходимых для получения результата.

После проведения 25-30 подобных циклов образуется определенное количество копий ДНК вирусов, по которым легко определить возбудителя заболевания.

Внимание: анализ ПЦР не отличает «мертвые» микроорганизмы от «живых», поэтому результат может быть положительным в течение определенного времени после проведенного лечения

Подготовка к анализу

Если сдается анализ крови ПЦР на туберкулез, то нет необходимости в специальной подготовке, но больным рекомендуется придерживаться общих правил: воздержаться от приема пищи не менее чем на 8 часов, исключить алкоголь и прием медикаментозных препаратов, не курить в течение часа перед забором материала.

Мокроту собирают в утреннее время после чистки зубов и тщательного полоскания полости рта.

Если экссудат выделяется плохо, накануне вечером следует принять отхаркивающий препарат или сделать ингаляцию. Диагностическую ценность имеет мокрота со слизью, гноем, белыми или желтоватыми вкраплениями.

Если взять мокроту на анализ невозможно, для выявления возбудителей заболевания используются смывы из бронхов. Такой анализ не требует подготовки, а забор материала выполняется следующим образом. С помощью гортанного шприца больному вливают в трахею раствор хлорида натрия, который вызывает сильный кашель — выкашлянная жидкость используется для исследования.

Внимание. Результат анализа искажают антибиотики, гепарин и другие препараты, использующиеся для местного лечения, поэтому исследование рекомендуется проводить через 10-14 дней после приема

Что нужно для точного результата?

Результат анализа ПЦР на туберкулез во многом зависит от условий транспортировки и хранения пробы, а также от течения заболевания. Забор материала в период ремиссии хронического заболевания может дать ложноотрицательный результат из-за подавления возбудителей клетками иммунной системы.

Не рекомендуется сдавать биологические жидкости и проводить анализ вне стен лаборатории, так как это может привести к загрязнению пробы и искажению результата. Немаловажную роль играет и соблюдение температурного режима при длительном хранении образцов — кровь перед анализом ПЦР нельзя замораживать.

Для справки. Объем биологического материала для анализа не должен быть избыточным, так как вместе с микроорганизмами в него попадают вещества, которые способны разрушить цепочку ДНК.

Интерпретация результатов

Результат исследования при анализе на ПЦР туберкулез, может расшифровываться двумя способами: простым и сложным. Простая интерпретация выдается в значениях «обнаружено» и «не обнаружено» (положительно или отрицательно).

1. Положительный результат обычно выглядит следующим образом: инфицирование микроорганизмами Mycobacterium tuberculosis.
2. Ложноположительный результат: обнаружены нежизнеспособные фрагменты ДНК микобактерий.
3. Отрицательный результат: Mycobacterium tuberculosi не обнаружены, обнаружено недостаточное количество детектируемых частиц.

Кроме того, при положительном результате часто используется сложная расшифровка, определяющая стадию и очаг заболевания. Интерпретировать результаты анализа в данном случае может только врач.